食品中总汞的测定方法

　　1　主题内容与适用范围

　　本标准规定了食品中总汞的测定方法。

　　本标准适用于食品中总汞的测定。

　　低检出浓度：冷原子吸收光谱法：(一)压力消解法为0.4μg/kg；(二)其他消解法为10μg/kg；第二法比色法为25μg/kg。

　　冷原子吸收光谱法

　　2　原理

　　汞蒸气对波长253.7nm的共振线具有强烈的吸收作用。样品经过酸消解或催化酸消解使汞转为离子状态，在强酸性介质中以氯化亚锡还原成元素汞，以氮气或干燥空气作为载体，将元素汞吹入汞测定仪，进行冷原子吸收测定，在一定浓度范围其吸收值与汞含量成正比，与标准系列比较定量。

　　(一)　压力消解法

　　3　试剂

　　分析过程中全部用水均使用去离子水(电阻率在8×105Ω以上)，所使用的化学试剂均为分析纯或优级纯。

　　3.1　硝酸。

　　3.2　盐酸。

　　3.3　过氧化氢(30%)。

　　3.4　硝酸(0.5＋99.5)：取0.5mL硝酸，慢慢加入50mL水中，然后加水稀释至100mL。

　　3.5　高锰酸钾溶液(50g/L)：称取5.0g高锰酸钾，置于100mL棕色瓶中，以水溶解稀释至100mL。

　　3.6　硝酸—重铬酸钾溶液(5＋0.05＋94.5)：称取0.05g重铬酸钾，溶于水中，加入5mL硝酸，用水稀释至100mL。

　　3.7　氯化亚锡溶液(100g/L)：称取10g氯化亚锡，溶于20mL盐酸中，以水稀释至100mL，临用时现配。

　　3.8　无水氯化钙。

　　3.9　汞标准储备液：准确称取0.1354g经干燥器干燥过的HgO2，溶于硝酸重铬酸钾溶液中，移入100mL容量瓶中，以硝酸—重铬酸钾溶液稀释至刻度。混匀。此溶液每毫升含1.0mg汞。

　　3.10　汞标准使用液：由1.0mg/mL汞标准储备液经硝酸—重铬酸钾溶液稀释成2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ng/mL的汞标准使用液。临用时现配。

　　4　仪器

　　所用玻璃仪器均需以硝酸(1＋5)浸泡过夜，用水反复冲洗，zui后用去离子水冲冼干净。

　　4.1　双光束测汞仪(附气体循环泵、气体干燥装置、汞蒸气发生装置及汞蒸气吸收瓶)。

　　4.2　恒温干燥箱。

　　4.3　压力消解器、压力消解罐或压力溶弹。

　　5　分析步骤

　　5.1　样品预处理

　　5.1.1　在采样和制备过程中，应注意不使样品污染。

　　5.1.2　粮食、豆类去杂质后，磨碎，过20目筛，储于塑料瓶中，保存备用。

　　5.1.3　蔬菜、水果、鱼类、肉类及蛋类等水分含量高的鲜样用食品加工机或匀浆机打成匀浆，储于塑料瓶中，保存备用。

　　5.2　样品消解(可根据实验室条件选用以下任何一种方法消解)

　　5.2.1　压力消解罐消解法：称取1.00～3.00g样品(干样、含脂肪高的样品少于1.00g，鲜样少于3.00g或按压力消解罐使用说明书称取样品)于聚四氟乙烯内罐，加硝酸2～4mL浸泡过夜。再加过氧化氢(30%)2～3mL(总量不能超过罐容积的1/3)。盖好内盖，旋紧不锈钢外套，放入恒温干燥箱，120～140℃保持3～4h，在箱内自然冷却至室温，用滴管将消化液洗入或过滤入(视消化后样品的盐分而定)10.0mL容量瓶中，用水少量多次洗涤罐，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，混匀备用；同时作试剂空白。

　　5.3　测定

　　5.3.1　仪器条件：打开测汞仪，预热1～2h，并将仪器性能调至*状态。

　　5.3.2　标准曲线绘制：吸取上面配制的汞标准使用液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ng/mL各5.0mL(相当于10.0，20.0，30.0，40.0，50.0ng汞)，置于测汞仪的汞蒸气发生器的还原瓶中，分别加入1.0mL还原剂氯化亚锡(100g/L)，迅速盖紧瓶塞，随后有气泡产生，从仪器读数显示的zui高点测得其吸收值，然后，打开吸收瓶上的三通阀将产生的汞蒸气吸收于高锰酸钾溶液(50g/L)中，待测汞仪上的读数达到零点时进行下一次测定。并求得吸光值与汞质量关系的一元线性回归方程。

　　5.3.3　样品测定：分别吸取样液和试剂空白液各5.0mL，置于测汞仪的汞蒸气发生器的还原瓶中，以下按5.3.2自“分别加入1.0mL还原剂氯化亚锡”起进行。将所测得其吸收值，代入标准系列的一元线性回归方程中求得样液中汞含量。

　　6　计算

　　式中：X1——样品中汞含量，μg/kg(μg/L)；

　　m1——测定样品消化液中汞质量，ng；

　　m2——试剂空白液中汞质量，ng；

　　V1——样品消化液总体积，mL；

　　V2——测定用样品消化液体积，mL；

　　m3——样品质量或体积，g或mL。

　　结果的表述：报告算术平均值的二位有效数字。

　　7　允许差

　　相对相差≤20%。

　　(二)　其他消化法

　　8　试剂

　　除特别注明外，所用试剂均为分析纯试剂，水均为去离子水。

　　8.1　硝酸。

　　8.2　硫酸。

　　8.3　氯化亚锡溶液(300g/L)：称取30g氯化亚锡(SnCl2·2H2O)，加少量水，并加2mL硫酸使溶解后，加水稀释至100mL，放置冰箱保存。

　　8.4　无水氯化钙：干燥用。

　　8.5　混合酸(1+1+8)：量取10mL硫酸，再加入10mL硝酸，慢慢倒入50mL水中，冷后加水稀释至100mL。

　　8.7　高锰酸钾溶液(50g/L)：配好后煮沸10min，静置过夜，过滤，贮于棕色瓶中。

　　8.8　盐酸羟胺溶液(200g/L)。

　　8.9　汞标准贮备溶液：准确称取0.1354g于干燥器干燥过的HgCl2，加混合酸(1＋1＋8)溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1.0mg汞。

　　8.10　汞标准使用液：吸取1.0mL汞标准贮备溶液，置于100mL容量瓶中，加混合酸(1＋1＋8)稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10.0μg汞。再吸取此液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加混合酸(1＋1＋8)稀释至刻度，此溶液每毫升相当于0.10μg汞，临用时现配。

　　9　仪器

　　9.1　消化装置。

　　9.2　测汞仪。附气体干燥和抽气装置。

　　9.3　汞蒸气发生器。

　　10　分析步骤

　　10.1　样品消化

　　10.1.1　回流消化法

　　10.1.1.1　粮食或水分少的食品：称取10.00g样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒，加45mL硝酸、10mL硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化。装上冷凝管后，小火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后，加热回流2h。如加热过程中溶液变棕色，再加5mL硝酸，继续回流2h，放冷后从冷凝管上端小心加20mL水，继续加热回流10min，放冷，用适量水冲洗冷凝管，洗液并入消化液中，将消化液经玻璃棉过滤于100mL容量瓶内，用少量水洗锥形瓶、滤器，洗液并入容量瓶内，加水至刻度，混匀。按同一方法做试剂空白试验。

　　10.1.1.2　植物油及动物油脂：称取5.00g样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒，加入7mL硫酸，小心混匀至溶液颜色变为棕色，然后加40mL硝酸，装上冷凝管后，以下按10.1.1.1自“小火加热”起依法操作。

　　10.1.1.3　薯类、豆制品：称取20.00g捣碎混匀的样品(薯类须预先洗净晾干)，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及30mL硝酸、5mL硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化。装上冷凝管后，以下按10.1.1.1自“小火加热”起依法操作。

　　10.1.1.4　肉、蛋类：称取10.00g捣碎混匀的样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及30mL硝酸、5mL硫酸、转动锥形瓶防止局部炭化。装上冷凝管后，以下按10.1.1.1自“小火加热”起依法操作。

　　10.1.1.5　牛乳及乳制品：称取20.00g牛乳或酸牛乳，或相当于20.00g牛乳的乳制品(2.4g全脂乳粉、8g甜炼乳，5g淡炼乳)，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及30mL硝酸，牛乳或酸牛乳加10mL硫酸，乳制品加5mL硫酸，转动锥形瓶防止局部炭化。装上冷凝管后，以下按10.1.1.1自“小火加热”起依法操作。

　　10.1.2　V2O5消化法

　　本法适用于水产品、蔬菜、水果。

　　10.1.2.1　取可食部分，洗净，晾干，切碎，混匀。取2.50g水产品或10.00g蔬菜、水果，置于50～100mL锥形瓶中，加50mgV2O5粉末，再加8mL硝酸，振摇，放置4h，加5mL硫酸，混匀，然后移至140℃砂浴上加热，开始作用较猛烈，以后渐渐缓慢，待瓶口基本上无棕色气体逸出时，用少量水冲洗瓶口，再加热5min，放冷，加5mL高锰酸钾溶液(50g/L)，放置4h(或过夜)，滴加盐酸羟胺溶液(200g/L)使紫色褪去，振摇，放置数分钟，移入容量瓶中，并稀释至刻度。蔬菜、水果为25mL，水产品为100mL。

　　按同一方法进行试剂空白试验。

　　10.2　测定

　　10.2.1　用回流消化法制备的样品消化液

　　10.2.1.1　吸取10.0mL样品消化液，置于汞蒸气发生器内，连接抽气装置，沿壁迅速加入3mL氯化亚锡溶液(300g/L)，立即通过流速为1.0L/min的氮气或经活性炭处理的空气，使汞蒸气经过氯化钙干燥管进入测汞仪中，读取测汞仪上zui大读数，同时做试剂空白试验。

　　10.2.1.2　吸取0，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50mL汞标准使用液(相当0，0.01，0.02，0.03，0.04，0.05μg汞)，置于试管中，各加10mL混合酸(1＋1＋8)，以下按10.2.1.1自“置于汞蒸气发生器内”起依法操作，绘制标准曲线。

　　10.2.2　用V2O5消化法制备的样品消化液

　　10.2.2.1　吸取10.0mL样品消化液，以下按10.2.1.1的方法操作。

　　10.2.2.2　吸取0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL汞标准使用液(相当0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5μg汞)，置于6个50mL容量瓶中，各加1mL硫酸(1＋1)、1mL高锰酸钾溶液(50g/L)，加20mL水，混匀，滴加盐酸羟胺溶液(200g/L)使紫色褪去，加水至刻度混匀，分别吸取10.0mL(相当0，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10μg汞)，以下按10.2.1.1自“置于汞蒸气发生器内”起依法操作。绘制标准曲线。

　　11　计算　

　　式中：X2——样品中汞的含量，mg/kg；

　　m4——测定用样品消化液中汞的质量，μg；

　　m5——试剂空白液中汞的质量，μg；

　　m6——样品质量，g；

　　V3——样品消化液总体积，mL；

　　V4——测定用样品消化液体积，mL。

　　结果的表述：报告算术平均值的二位有效数字。

　　12　允许差

　　相对相差≤15%。

　　第二篇　二硫腙比色法(第二法)

　　13　原理

　　样品经消化后，汞离子在酸性溶液中可与二硫腙生成橙红络合物，溶于CHCL3，与标准系列比较定量。

　　14　试剂

　　14.1　硝酸。

　　14.2　硫酸。

　　14.3　氨水。

　　14.4　CHCL3：不应含有氧化物。

　　14.5　硫酸(1＋35)：量取5mL硫酸，缓缓倒入150mL水中，冷后加水至180mL。

　　14.6　硫酸(1＋19)：量取5mL硫酸，缓缓倒入水中，冷后加水至100mL。

　　14.7　盐酸羟胺溶液(200g/L)：吹清洁空气，除去溶液中含有的微量汞。

　　14.8　溴麝香草酚蓝—乙醇指示液(1g/L)。

　　14.9　二硫腙－CHCL3溶液(0.5g/L)，保存冰箱中，必要时用下述方法纯化。

　　称取0.5g研细的二硫腙，溶于50mLCHCL3中，如不全溶，可用滤纸过滤于250mL分液漏斗中，用氨水(1＋99)提取三次，每次100mL，将提取液用棉花过滤至500mL分液漏斗中，用盐酸(1＋1)调至酸性，将沉淀出的二硫腙用CHCL3提取2～3次，每次20mL，合并CHCL3层，用等量水洗涤二次，弃去洗涤液，在50℃水浴上蒸去CHCL3。精制的二硫腙置硫酸干燥器中，干燥备用，或将沉淀出的二硫腙用200、200、100mLCHCL3提取三次，合并CHCL3层为二硫腙溶液。

　　14.10　二硫腙使用液：吸取1.0mL二硫腙溶液，加CHCL3至10mL，混匀。用1cm比色杯，以CHCL3调节零点，于波长510nm处测吸光度(A)，用式(3)算出配制100mL二硫腙使用液(70%透光率)所需二硫腙溶液的毫升数(V)。　

　　14.11　汞标准溶液：准确称取0.1354g经干燥器干燥过的HgCl2，加硫酸(1＋35)使其溶解后，移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1.0mg汞。

　　14.12　汞标准使用液：吸取1.0mL汞标准溶液，置于100mL容量瓶中，加硫酸(1＋35)稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10.0μg汞。再吸取此液5.0mL于50mL容量瓶中，加硫酸(1＋35)稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1.0μg汞。

　　15　仪器

　　15.1　消化装置。

　　15.2　可见分光光度计。

　　16　分析步骤

　　16.1　样品消化

　　16.1.1　粮食或水分少的食品：称取20.00g样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及80mL硝酸、15mL硫酸，转动锥形瓶，防止局部炭化。装上冷凝管后，小火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后加热回流2h。如加热过程中溶液变棕色，再加5mL硝酸，继续回流2h，放冷，用适量水洗涤冷凝管，洗液并入消化液中，取下锥形瓶，加水至总体积为150mL。按同一方法做试剂空白试验。

　　16.1.2　植物油及动物油脂：称取10.00g样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及15mL硫酸，小心混匀至溶液变棕色，然后加入45mL硝酸，装上冷凝管后，以下按16.1.1自“小火加热”起依法操作。

　　16.1.3　蔬菜、水果、薯类、豆制品：称取50.00g捣碎、混匀的样品(豆制品直接取样，其他样品取可食部分洗净、晾干)，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及45mL硝酸、15mL硫酸，转动锥形瓶，防止局部炭化。装上冷凝管后，以下按16.1.1自“小火加热”起依法操作。

　　16.1.4　肉、蛋、水产品：称取20.00g捣碎混匀样品，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及45mL硝酸、15mL硫酸，装上冷凝管后，以下按16.1.1自“小火加热”起依法操作。

　　16.1.5　牛乳及乳制品：称取50.00g牛乳、酸牛乳，或相当于50.00g牛乳的乳制品(6g全脂乳粉，20g甜炼乳，12.5g淡炼乳)，置于消化装置锥形瓶中，加玻璃珠数粒及45mL硝酸，牛乳、酸牛乳加15mL硫酸，乳制品加10mL硫酸，装上冷凝管，以下按16.1.1自“小火加热”起依法操作。

　　17　测定

　　17.1　取16.1.1～16.1.5消化液(全量)，加20mL水，在电炉上煮沸10min，除去二氧化氮等，放冷。

　　17.2　于样品消化液及试剂空白液中各加高锰酸钾溶液(50g/L)至溶液呈紫色，然后再加盐酸羟胺溶液(200g/L)使紫色褪去，加2滴麝香草酚蓝指示液，用氨水调节pH，使橙红色变为橙黄色(PH1～2)。定量转移至125mL分液漏斗中。

　　17.3　吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0μL汞标准使用液(相当于0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0μg汞)，分别置于125mL分液漏斗中，加10mL硫酸(1＋19)，再加水至40mL，混匀。再各加1mL盐酸羟胺溶液(200g/L)，放置20min，并时时振摇。

　　17.4　于样品消化液、试剂空白液及标准液振摇放冷后的分液漏斗中加5.0mL二硫踪使用液，剧烈振摇2min，静置分层后，经脱脂棉将CHCL3层滤入1cm比色杯中，以CHCL3调节零点，在波长490nm处测吸光度，标准管吸光度减去零管吸光度，绘制标准曲线。

　　18　计算　

　　式中：X3——样品中汞的含量，mg/kg；

　　m7——样品消化液中汞的质量，μg；

　　m8——试剂空白液中汞的质量，μg；

　　m9——样品质量，g。

　　结果的表述：报告算术平均值的二位有效数字。

　　19　允许差

　　相对相差≤10%。

　　附加说明：

　　本标准由卫生部卫生监督司提出。